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干货:细胞系十大常见问题及解析
点击次数:22次 发布时间:2019-11-21 返回

 

    细胞系(cell line)指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体。 也指可长期连续传代的培养细胞。(由此便引申出了后来的有限细胞系(FiniteCellLine)、无限细胞系(InfiniteCellLine)),因此,细胞系狭义的是指可连续传代的细胞(特定环境下口语和书面语都使用),广义是指可传代的细胞。

    在做细胞系实验时,经常遇到的问题今天小编就给大家整理出来了,收下这份干货,从实验小白到大神您只需一步!

    一、如何根据 STR 数据判断细胞系的身份?
    收到细胞系鉴定结果以及 STR 信息,可以与参考数据库进行比对。如果细胞样本的每个 STR 位点和参考细胞 STR 位点都能重合匹配,即说明该细胞系正确,反之则说明你的细胞系可能被错误标记,交叉污染或发生遗传不稳定。一般说来,匹配度≥80%即可认为该细胞系正确,匹配度<80%则说明该细胞系的来源需要被怀疑。

    如果细胞系被鉴定出发生交叉污染或错误标记,则需要拿更早代数的细胞进行鉴定,从而找到问题的起源或者直接从可靠的机构购买一株新的细胞系。

    二、如果细胞系没有在数据库中比对出结果怎么办?
    如果已知数据库中没有找到你的细胞信息,你可以用自己的细胞遗传信息建立自己的遗传特性,以便后期进行自己细胞库的比对。

    三、细胞系交叉污染或错误鉴定对研究是否有影响
    答案是肯定的。使用错误的细胞系或者是被污染的细胞系做研究,只会造成时间,金钱和精力的损失,以及造成实验结果的不一致和不可重复。因此如果用被污染或错误的细胞系做研究,在发表文章或做进一步研究时极有可能需要用正确的细胞再重复实验。

    四、全球因为细胞系用错浪费了多少钱?
    据不完全统计,仅就 HEp-2 与 Int-407 这两株细胞(它们实际上是 Hela), 直接浪费的投入是 7 亿美金,间接浪费了 7 亿美金。

    五、因为用错细胞,产生了多少垃圾文章?
    据不完全统计,仅就 HEp-2 与 Int-407 这两株细胞(它们实际上是 Hela), 前者发表了近 6000 篇 SCI(17 万次引用),后者发表了近 1400 篇 SCI。

    六、用错细胞时间最长的持续了多少时间?
    瑞典有一个科学家,在三十年的时间里都以为自己的细胞是正确的,直到做了细胞鉴定之后发现是错误的。越早发现错误越好,鉴定之后是正确的话,自己也放心。

    七、为什么报告内最终结论,会出现匹配不上任何已知数据情况?
    最大的可能性是因为这株细胞的标准序列并没有收录在国际的细胞库之中,导致送检样本与任何的序列都不匹。出现这种情况大多数是因为该细胞系,可能是由国内课题组自主建系的。

    八、国内有类似的 STR 标准数据库吗?
    是有的,这个是协和医院官方建立的一个国家实验细胞资源共享平台,http://www.cellresource.cn /在里面会收录一些国内自主建系的细胞的标准序列。

    九、对于 STR 位点引物设计有什么要求吗?
    设计其实很简单,并且很容易使用。但是由于这个位点的选择和优化是非常枯燥并且耗时耗力的工作,建议由专业的服务方进行设计和合成。
    
    十、除了检测人源的细胞株,还可以检测其他动物的细胞或者原代细胞吗?
    技术上是可以检测的。但是鼠源细胞在结果上跟人源细胞有明显的区别。鼠源一个 STR 位点会出现上百个重复,只能证明待测样本不是人源的样本。但是属于小鼠的具体哪一种细胞株,无法确定,因此也不能排除鼠源细胞之间出现交叉污染的可能。

    至于人的原代细胞,由于国际上的数据库里面没有收录原代细胞标准序列,最终的检测结果也是匹配不上任何的已知序列的。

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